利用基因工程技术获得高抗病毒马铃薯植株的方法
专利类型：发明专利
语 言：中文
申 请 号：CN200910191952.5
申 请 日：20091216
申 请 人：重庆大学
申请人地址：400044 重庆市沙坪坝区沙正街174号
公 开 日：20120118
公 开 号：CN101717785B
代 理 人：谢殿武
代理机构：北京同恒源知识产权代理有限公司 11275
摘 要：本发明公开了一种利用基因工程技术获得高抗病毒马铃薯植株的方法，包括Tm-22基因的克隆及其超表达载体的构建、农杆菌的侵染转化、高抗病毒马铃薯植株的检测；本发明根据已知番茄抗病基因Tm-22抗病机理及其对病毒(如TMV、ToMV等)的高抗特性，利用番茄与马铃薯亲缘关系较近特点，采用基因工程技术将Tm-22基因转入马铃薯，并通过筛选、鉴定而获得已表达Tm-22基因的高抗病毒马铃薯植株，提高了马铃薯植株对常见病毒的抗性；本发明通过植物基因转化马铃薯，能够避免环境风险及食用安全风险，有助于把马铃薯抗病研究推向一个新的台阶，为实际应用于农业生产作出了积极探索。
主 权 项：一种利用基因工程技术获得高抗病毒马铃薯植株的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)制取番茄抗病基因TM-22；根据番茄抗病基因TM-22的序列设计两对特异性引物并在上游引物5’端加上限制性内切酶酶切位点，然后提取番茄RNA并分别以两对特异性引物进行RT-PCR扩增，得到TM-22基因前段和后段的扩增产物；将所得TM-22基因前段和后段的扩增产物克隆入两个PMD18-T载体，再进行酶切，酶切产物经纯化后连接，得全长TM-22基因DNA序列；(2)超表达载体的构建提取全长TM-22片段并克隆到含CAMV35S启动子和终止子的PDH51载体中，得PDH51-TM-22质粒，酶切PDH51-TM-22质粒并将所得片段克隆到PBIN19载体，得超表达双元载体PBIN19-TM-22；(3)农杆菌的侵染转化将经过预培养获得的马铃薯外植体置于含有PBIN19-TM-22双元载体的LBA4404农杆菌的菌液中浸染并经共培养、诱导生芽及选择性生根培养，得转基因马铃薯植株；(4)转基因植株的检测采用PCR、RT-PCR检测方法从所得转基因马铃薯植株中筛选阳性植株，所得阳性植株经活体抗病性接种鉴定，获得高抗病毒马铃薯植株。
关 键 词：
法律状态：生效
IPC专利分类号：A01H5/00; C12N15/84