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壳聚糖-精氨酸阴离子树脂固定化胰凝乳蛋白酶的方法

专利类型:发明专利 

语 言:中文 

申 请 号:CN200810069793.7 

申 请 日:20080603 

发 明 人:周小华柳小平王东王娟 

申 请 人:重庆大学 

申请人地址:400044 重庆市沙坪坝区沙正街174号 

公 开 日:20110907 

公 开 号:CN101285060B 

代 理 人: 

代理机构: 

摘  要:一种壳聚糖-精氨酸阴离子树脂固定化胰凝乳蛋白酶的方法,涉及壳聚糖衍生物固定化酶的方法。本发明以市售壳聚糖为原料,先制备交联壳聚糖树脂。再制备壳聚糖-精氨酸阴离子树脂,最后进行希夫反应固定化胰凝乳蛋白酶而得成品。本发明具有方法简单,操作简便,反应条件温和,生产成本低,固定化酶的稳定性高,酶活回收率高达89.95%,半衰期长,即75℃的半衰期长达18小时,4℃的半衰期长达56天,最适pH值仅为5.92。采用本发明制备出的产品,可广泛应用于医药、食品、轻工业等行业的各种水相及非水相的酶促反应。 

主 权 项:1.一种壳聚糖-精氨酸阴离子树脂固定化胰凝乳蛋白酶的方法,其特征在于具体的方法步骤如下:(1)制备交联壳聚糖树脂以市售壳聚糖为原料,先将壳聚糖加入盐酸质量百分数为1~5%稀盐酸中,就制备出壳聚糖质量百分数为1~4%的壳聚糖酸性溶胶,后按壳聚糖酸性溶胶∶液体石蜡的体积比为1∶1~4的比例,将壳聚糖酸性溶胶缓慢加入液体石蜡中,搅拌20~30MIN,并加热升温至35~45℃制得到壳聚糖石蜡溶液后,再加入占壳聚糖石蜡溶液体积分数为0.05~0.25%的吐温80,进行乳化20~30MIN,然后加入占壳聚糖石蜡溶液体积分数为0.05~0.3%戊二醛交联剂,再加入占壳聚糖石蜡溶液质量分数为0.01~0.1%碳酸钙致孔剂,进行制孔反应50~70MIN制得壳聚糖微球的悬浮液,最后用氢氧化钠溶液调节壳聚糖微球悬浮液的PH值为9~10,并加热至55~75℃,搅拌固化2~4H,再过滤,弃滤液,收集滤渣,对滤渣先用乙醇洗涤3~6次,后用质量分数为1~5%稀盐酸溶解滤渣中的碳酸钙,再用蒸馏水洗涤至中性;(2)壳聚糖-精氨酸阴离子树脂的制备第(1)步完成后,将第(1)步制备出的交联壳聚糖树脂,加入精氨酸质量分数为0.5~2.0%精氨酸溶液中,振荡20~30MIN,制备出壳聚糖质量分数为0.5~2.5%的壳聚糖-精氨酸溶液,然后按壳聚糖-精氨酸溶液中精氨酸∶二环己基碳二亚胺的摩尔比为1∶0.5~2.5的比例,在壳聚糖-精氨酸溶液中,加入DCC接肽缩合剂,进行缩合反应20~40MIN,最后经过滤,弃滤液,收集滤渣,对滤渣先用乙醇洗涤3~6次,后用蒸馏水透析8~12H后,再过滤,再弃滤液,再收集滤渣;(3)胰凝乳蛋白酶的固定第(2)步完成后,先将胰凝乳蛋白酶加入PH值为4.5~6.0磷酸盐缓冲液中,搅拌均匀,就制备出胰凝乳蛋白酶的摩尔浓度为0.05~0.08MOL/L的胰凝乳蛋白酶磷酸盐溶液,后按第(2)步制备出的壳聚糖-精氨酸阴离子树脂∶胰凝乳蛋白酶磷酸盐溶液中胰凝乳蛋白酶的质量比为1∶15~25的比例,将壳聚糖-精氨酸阴离子树脂加入胰凝乳蛋白酶磷酸盐溶液中,在30~60℃的恒温水浴条件下,振荡20~40MIN,再按戊二醛∶壳聚糖-精氨酸阴离子树脂的质量比为1∶6~14的比例,将戊二醛加入到悬浮壳聚糖-精氨酸阴离子树脂的胰凝乳蛋白酶磷酸盐溶液中,并置于振荡器中振荡,进行希夫反应50~70MIN后,进行抽滤,弃滤液,收集树脂滤渣,对树脂滤渣用磷酸盐缓冲液洗涤4~7次,再抽滤,再弃滤液,再收集壳聚糖-精氨酸阴离子固定化胰凝乳蛋白酶滤渣。 

关 键 词: 

法律状态:生效 

IPC专利分类号:C12N11/10