一种制备巯基短肽金属螯合物的方法
专利类型：发明专利
语 言：中文
申 请 号：CN201510239635.1
申 请 日：20150511
申 请 人：重庆大学
申请人地址：400044 重庆市沙坪坝区沙正街174号
公 开 日：20180424
公 开 号：CN104805166B
代 理 人：
代理机构：
摘 要：一种制备巯基短肽金属螯合物的方法，涉及到以谷物蛋白水解液分离的巯基短肽制备金属螯合物的方法与技术。本发明以谷物蛋白粉为原料，通过双酶水解法，制备出水解谷蛋白液；之后与巯基交换树脂进行交换提纯，ZnCl2溶液洗脱、螯合、透析、冻干，制备出巯基短肽金属螯合物。本发明方法在常温常压下进行，是安全生产，无“三废”污染，成本低，附加值高且便于推广应用的方法，可广泛应用于营养保健品和日用化妆品方面，还可应用于食品与医药行业中。
主 权 项：一种制备巯基短肽金属螯合物的方法，其特征在于具体的工艺步骤如下：(1)制备水解谷蛋白液取麦蛋白粉或玉米蛋白粉或大米蛋白粉，用粉碎机粉碎后过60～120目的振动筛，分别收集过筛物和未过筛物，对收集的未过筛物，送入粉碎机中重新破碎；对收集的过筛物，按照过筛物质量与纯净水体积之比为1kg∶10～20L的比例，在搅拌下分散至纯净水中，再用稀NaOH溶液调节pH值至8.5～10.5；接着在搅拌下升温至50～65℃，加入诺维信碱性蛋白酶Alcalase?3.0T进行一级酶水解1.5～2h，其中诺维信碱性蛋白酶Alcalase?3.0T与过筛物质量之比为1kg∶30～50kg；一级酶水解完成后，用稀HCl溶液调节pH值至5～6.5，维持温度与一级酶水解反应温度相同，加入木瓜蛋白酶进行二级酶水解1.5～2h，其中木瓜蛋白酶与过筛物质量之比为1kg∶30～50kg的比例；水解反应完成后放料入碟式分离机中，在6000～8000r/min的转速下进行离心分离，分别收集离心清液和离心沉淀，对收集的离心沉淀，干燥后粉碎，用做饲料蛋白添加剂；对收集的离心清液，即为水解谷蛋白液，用于下一步制备水解谷蛋白短肽溶液；(2)制备水解谷蛋白短肽溶液第(1)步完成后，先将第(1)步收集的水解谷蛋白液泵入截留分子量为1000～3000Da的纳滤器中，在表压为0.05～0.2MPa下进行第一次纳滤，直至第一次纳滤截留液体积降低至水解谷蛋白液体积的1/10～1/20时止；分别收集第一次纳滤截留液和第一次纳滤滤过液，对收集的第一次纳滤截留液，含溶解性淀粉和蛋白质，与第(1)步收集的离心沉淀合并，干燥后用于饲料蛋白添加剂；对于收集的第一次纳滤滤过液，再次泵入截留分子量为100～500Da的纳滤器中，在表压为0.05～0.2MPa下进行第二次纳滤，直至第二次纳滤截留液体积降低至第一次纳滤滤过液体积的1/10～1/20时止；分别收集第二次纳滤截留液和第二次纳滤滤过液，对于收集的第二次纳滤滤过液，含无机盐离子和小分子肽，用于日用化妆品中的营养成分；对收集的第二次纳滤截留液，即为水解谷蛋白短肽溶液；(3)制备ZnCl2水溶液第(2)步完成后，按照锌粉质量与体积浓度为2～10％的HCl溶液体积之比为1kg∶10～20L的比例，将锌粉投入到体积浓度为2～10％的HCl溶液中，搅拌下溶解1～3h，再真空过滤，收集滤液并用纯净水稀释至Zn浓度为0.1～0.5mol/L时止，就制备出ZnCl2水溶液，用于下一步制备巯基短肽金属螯合物溶液；(4)制备巯基短肽金属螯合物溶液第(2)和(3)步完成后，先将第(2)步制备的水解谷蛋白短肽溶液泵入装有活化ZXC610硫脲树脂或申请号为201510044783.8、名称为“一种制备巯基修饰壳聚糖浅孔微球的方法”的发?明专利所公开制备的浅孔微球状巯基乙胺改性壳聚糖微球的层析柱中，进行交换分离；其中ZXC610硫脲树脂和浅孔微球状巯基乙胺改性壳聚糖微球统称为巯基交换树脂，巯基交换树脂体积与水解谷蛋白短肽溶液体积之比为1L∶20～40L，水解谷蛋白短肽溶液的泵入流速为1～4倍层析柱体积BV/h；分别收集过柱液和交换有巯基短肽的层析柱，对收集的过柱液，进行减压浓缩，用于制备发用植物水解蛋白浓缩液；对于收集的交换有巯基短肽的层析柱，先用1～2BV纯净水洗涤，分别收集洗涤液和经洗涤后的层析柱，对收集的纯净水洗涤液，与收集的过柱液合并后用于制备发用植物水解蛋白浓缩液；对于收集的经洗涤后的层析柱，用2～4BV、锌浓度为0.1～0.5mol/L的ZnCl2水溶液、以1～4BV/h的流速进行洗脱，分别收集洗脱液和经该ZnCl2水溶液洗脱的层析柱，对收集的洗脱液，即为巯基短肽金属螯合物溶液，用于下一步制备巯基短肽金属螯合物冻干粉；对于收集的经该ZnCl2水溶液洗脱的层析柱，再用2～5BV的、浓度为0.05～0.15mol/L的HCl溶液，以1～4BV/h的速度进行再生；分别收集再生过柱液和经再生后的层析柱，对收集的再生过柱液，用于再次溶解锌粒，制备浓度为0.1～0.5mol/L的ZnCl2水溶液；对于收集的经再生后的层析柱，用于下批次交换巯基短肽；(5)制备巯基短肽金属螯合物冻干粉第(4)步完成后，将第(4)步制备的巯基短肽金属螯合物溶液置于恒温夹层反应器中，在温度为55～65℃，pH值为3～6的条件下，进行螯合反应6～8h；反应完成后，将该螯合液置于截留分子量为100～500Da的透析机中，进行透析纯化3～8h，分别收集截留液与透过液；对收集的透过液，泵入反渗透器中，在表压为0.2～0.4MPa条件下进行反渗透浓缩，直至透过液体积降低至原体积的1/10～1/20时止，即制备出稀ZnCl2溶液，用于制备下批次浓度为0.1～0.5mol/L的ZnCl2水溶液；对收集的截留液，置于温度为?45～?55℃，绝对真空度为35～45Pa的条件下冷冻干燥36～48h，即制备出巯基短肽金属螯合物冻干粉，纯度达90％以上。
关 键 词：短肽;金属螯合物;巯基;谷物蛋白;制备巯基;制备;制备金属螯合;日用化妆品;营养保健品;常温常压;交换树脂;双酶水解;医药行业;谷蛋白;水解液;提纯;冻干;水解;透析;洗脱;螯合;应用;安全生产;污染;交换
法律状态：
IPC专利分类号：C12P21/06(2006.01)I,C07K1/34(2006.01)I,C07K1/107(2006.01)I,A23K20/147(2016.01)I,A61K8/64(2006.01)I