专利类型：发明专利
语 言：中文
申 请 号：CN201610044381.2
申 请 日：20160121
发 明 人：晏艳周小华石业新宿长琼余红梅杨洋袁德宽姚萍
申 请 人：重庆大学
申请人地址：401331 重庆市沙坪坝区大学城南路55号
公 开 日：20160511
公 开 号：CN105566444A
代 理 人：
代理机构：
摘 要：一种制备莱菔子分离蛋白粉和水解浓缩液的方法，涉及到蛋白质分离和水解的方法和技术。本发明以脱脂莱菔子粉为原料，先制备莱菔子分离蛋白提取液，再利用超滤技术分离浓缩制备莱菔子分离蛋白；最终经冷冻干燥制备莱菔子分离蛋白冻干粉；另一条工艺路线是将莱菔子分离蛋白酶解；最后利用反渗透技术制备水解莱菔子分离蛋白浓缩液。本发明具有操作简便，设备简单，反应条件温和，节约能源，生产成本低，是一种绿色的生产工艺，便于推广应用等特点。本方法制备的产品可广泛应用于食品和日化等领域。
主 权 项：一种制备莱菔子分离蛋白粉和水解浓缩液的方法，其特征在于具体的工艺步骤如下：![]()
制备莱菔子残渣按照脱脂莱菔子粉质量(kg)与pH为3～4柠檬酸溶液的体积(L)比为1∶4～8的比例，先将该柠檬酸溶液泵入不锈钢水解罐，开启搅拌器和循环热水，待柠檬酸溶液升温至30～40℃时，再将脱脂莱菔子粉加入，接着，在30～40℃下搅拌水解4～8小时，水解完成后，将水解物放料，进入碟式离心机，于5000～6000r/min的条件下进行第一次离心分离并分别收集第一次水解离心分离渣和水解离心上层清液，对收集的第一次水解离心分离渣，用螺杆泵泵入洗涤釜中，加入纯净水进行搅拌洗涤两次，每次洗涤时间均为15～30分钟，每次洗涤时纯净水加入体积均与上述柠檬酸溶液体积相同，每次洗涤完成后，都将洗涤物放料进入碟式离心机，于5000～6000r/min的条件下进行离心分离并分别收集洗涤离心分离渣和洗涤离心上层清液，对收集的第一次水解离心上层清液和两次洗涤离心上层清液，进行合并，即为莱菔素水解液，用于莱菔素的制备；对收集的洗涤离心分离渣，即为莱菔子残渣，用于下一步莱菔子分离蛋白提取液的制备；![]()
制备莱菔子分离蛋白提取液按第1步收集的莱菔子残渣质量(kg)与pH为5～6.5柠檬酸溶液体积(L)比为1∶4～8的比例，先将该柠檬酸溶液泵入不锈钢提取罐，开启搅拌器和循环热水，待柠檬酸液升温至45～65℃时，再将莱菔子残渣加入，接着，在45～65℃下搅拌提取3～5小时，提取完成后，将提取物放料进入碟式离心机，于5000～6000r/min的条件下进行第一次离心并分别收集第一次提取离心分离渣和第一次提取离心上层清液，对收集的第一次提取离心分离渣，加入柠檬酸溶液进行第二次提取，第二次提取时柠檬酸溶液的加入体积、pH值、浓度、提取时间及离心分离的条件均与第一次提取时相同，第二次提取和离心分离完成后，将第一次提取离心上层清液和第二次提取离心上层清液合并，即制备出莱菔子分离蛋白提取液，用于下一步制备莱菔子分离蛋白，对收集的第二次提取离心分离渣，进行洗涤离心操作，条件过程均与第1步中洗涤离心操作相同，分别收集洗涤离心分离渣和洗涤清液，对收集的洗涤离心分离渣，烘干后用作动物饲料或土壤改良剂；对收集的洗涤清液，进行回收柠檬酸处理，循环使用；![]()
制备莱菔子分离蛋白对第2步收集的莱菔子分离蛋白提取液，泵入截留分子量为50K～150KDa的超滤器中，进行第一级超滤，以截留大分子多糖，超滤表压为0.05～0.2MPa，直至截留液出现明显沉淀时停止，分别收集第一级超滤截留液和第一级超滤滤过液，对收集的第一级超滤截留液，进行喷雾干燥，用于制备莱菔子多糖；对收集的第一级超滤滤过液，泵入截留分子量为10K～30KDa的超滤器中，进行第二级超滤，超滤表压为0.05～0.2MPa，直至截留液出现明显沉淀时停止，分别收集第二级超滤截留液和第二级超滤滤过液，对收集的第二级超滤截留液，泵入碟式离心机，于3000～4000r/min的条件下进行离心分离，分别收集离心渣和离心清液，对收集的离心渣，即为莱菔子分离蛋白，一部分用于制备莱菔子分离蛋白冻干粉，另一部分用于制备莱菔子分离蛋白水解液；对收集的离心清液，与第二级超滤滤过液合并，泵入截留分子量为150～500Da的纳滤器中进行纳滤处理，纳滤表压为0.2～0.5MPa，直至纳滤截留液体积为纳滤滤过液体积的1/5～1/10时停止，分别收集纳滤截留液和纳滤滤过液，对收集的纳滤截留液，含柠檬酸，与第2步收集的洗涤清液合并，调节pH至3～4，后可再次回收用于下批次脱脂莱菔子粉水解，生成莱菔素和莱菔子残渣；对收集的纳滤滤过液，进行生化处理，达标后排放；![]()
制备莱菔子分离蛋白冻干粉将第3步收集的莱菔子分离蛋白用螺杆泵泵入冷冻干燥机，采用真空冷冻干燥法于?20℃～?50℃预先将莱菔子分离蛋白里面的水份冻结，冻结5～6小时，冻结实后将其放置于冷冻干燥机内，开启真空泵、真空计，再在真空无菌的环境下将莱菔子分离蛋白里面被冻结的水份升华，冷冻干燥温度为?60℃～?50℃，绝对真空度为20～50Pa，即得到莱菔子分离蛋白冻干粉；![]()
制备莱菔子分离蛋白水解液第3步完成后，将第3步收集的莱菔子分离蛋白用螺杆泵泵入水解罐，在搅拌下加入纯净水分散10～20分钟，按莱菔子分离蛋白质量(kg)与纯净水体积(L)之比为1∶10～20的比例，向水解罐中加入物料，向水解罐夹层通入温度为50℃～60℃的循环水升温，待水解罐内莱菔子分离蛋白分散液的温度上升至50℃～60℃后，用稀氧化钠溶液调节其pH至8.5～9.5，再在搅拌下，按照诺维信3.0T碱性蛋白酶与莱菔子分离蛋白的质量之比为1∶50～200的比例加入该酶，，进行第一级酶水解，水解时间1～3小时，水解温度为50℃～60℃，第一级酶水解完成后，再在搅拌下加入诺维信复合风味蛋白酶，进行第二级酶水解，水解时间为3～5小时，水解温度为50℃～60℃，加入该酶的质量与上述的诺维信3.0T碱性蛋白酶相同，第二级酶水解完成后，即制备出莱菔子分离蛋白水解液，用于下步制备水解莱菔子分离蛋白浓缩液；![]()
制备水解莱菔子分离蛋白浓缩液第5步完成后，将第5步收集的莱菔子分离蛋白水解液用螺杆泵泵入脱色罐中，在搅拌下升温至80～95℃，再按照活性炭粉质量(kg)：莱菔子分离蛋白水解液体积(L)为1∶10～20的比例，加入活性炭粉，在80～95℃的条件下搅拌脱色1～2小时，脱色完成后，在相对真空度为?0.06～?0.09MPa下进行真空过滤，分别收集真空过滤渣和真空过滤液，对收集的真空过滤渣，即为废活性炭，送活性炭再生厂进行再生处理；对收集的真空过滤液，泵入截留分子量为1K～3KDa的超滤器中进行超滤，超滤表压为0.05～0.2MPa，直至超滤截留液的蛋白质质量浓度达到15～20％时停止，分别收集超滤截留液和超滤滤过液，对收集的超滤截留液，即为水解莱菔子分离蛋白浓缩液A，平均分子量为2.5K～3.5KDa，用于配制营养类发用洗涤剂；对于收集的超滤滤过液，进行反渗透浓缩，反渗透表压为0.1～0.5MPa，直至反渗透截留液中蛋白质质量浓度达到10～15％时停止，分别收集反渗透滤过液和反渗透截留液，对收集的反渗透滤过液，即为纯净水，可回用于下批次配制柠檬酸溶液；对于收集的反渗透截留液，即为水解莱菔子分离蛋白浓缩液B，平均分子量为0.5K～2.5KDa，用于配制营养类护肤产品。
关 键 词：
法律状态：公开
IPC专利分类号：C07K1/34(2006.01)I;C12P21/06(2006.01)I;A61K8/97(2006.01)I;A61K8/64(2006.01)I;A61Q19/00(2006.01)I
