一种从胭脂萝卜籽中制备高纯度莱菔素的方法
专利类型：发明专利
语 言：中文
申 请 号：CN201510270292.5
申 请 日：20150522
申 请 人：广州六顺生物科技有限公司重庆大学
申请人地址：510663 广东省广州市高新技术产业开发区科学城掬泉路3号广州国际企业孵化器A区A202号
公 开 日：20150902
公 开 号：CN104876843A
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摘 要：一种从胭脂萝卜籽中制备高纯度莱菔素的方法，涉及到从胭脂萝卜籽中快速稳定制备高纯度莱菔素的方法技术。本发明以市售脱脂后的胭脂萝卜籽粉为原料，经过酶解、离心，离心液依次经过树脂粗分离、高效液相色谱制备分离，制备出莱菔素制备液；最终通过醇水快速置换、浓缩以及冷冻干燥，得到纯度为99％以上的莱菔素产品。该方法操作简单、高效、连续性强、溶剂可反复回收利用，树脂可再生循环，产品稳定且纯度高，解决了莱菔素在水中易重排或异构化、产品不易长久保存等问题。采用本方法制备出的莱菔素产品可广泛用于保健品及医药领域。
主 权 项：一种从胭脂萝卜籽中制备高纯度莱菔素的方法，其特征在于具体的工艺步骤如下：(1)制备莱菔素粗提取液首先，配制出pH为3.0～4.5、浓度为0.1～0.5mol/L的柠檬酸?柠檬酸三钠缓冲溶液或pH为3.0～4.5、浓度为0.1～0.5mol/L柠檬酸缓冲溶液，再按照市售脱脂后的胭脂萝卜籽粉质量与该缓冲溶液体积之比为1kg∶4L～1kg∶10L的比例，在搅拌下将市售脱脂后的胭脂萝卜籽粉分散于该缓冲溶液中，于30～40℃恒温水解反应1.5～3h；水解反应完成后进行过滤，分别收集滤过液和滤渣，对收集的滤渣，烘干后用作家畜饲料添加剂；对收集的滤液，用稀HCl溶液调节pH至2～4后用管式离心机以10000～15000r/min的转速离心，分别收集离心清液和离心沉淀，对收集的离心沉淀，即为莱菔子蛋白质，与过滤收集的滤渣合并，烘干后用作家畜饲料添加剂；对收集的离心清液，即为莱菔素粗提取液，放置于0～4℃的冷藏室中避光保存，用于下一步制备莱菔素粗分离液；(2)制备莱菔素粗分离液第(1)步完成后，将活化的大孔吸附树脂sp700或sp850，用湿法装入中压层析柱，其中大孔吸附树脂体积与第(1)步制备的莱菔素粗提取液体积之比为1L∶10L～1L∶16L，再安装好转换接头并分别连接恒流泵和紫外检测器，就组装成莱菔素粗分离系统；莱菔素粗分离系统组装完成后，开启恒流泵，将第(1)步制备的莱菔素粗提取液以1～2BV/h的流速泵入莱菔素粗分离系统中，分别收集用过柱液和吸附莱菔素的大孔吸附树脂柱，对收集的过柱液，泵入生化处理池进行处理，达标后排放；对收集的吸附莱菔素的大孔吸附树脂柱，先用1～3BV的纯净水冲洗，再泵入3～6BV、体积浓度为10～15％的甲醇洗脱液，以1～3BV/h的流速洗脱杂质，分别收集冲洗液、体积浓度为10～15％的过柱甲醇洗脱液和经过该过柱甲醇洗脱液处理的大孔吸附树脂柱，对收集的冲洗液，泵入生化处理池进行处理，达标后排放；对收集的体积浓度为10～15％的过柱甲醇洗脱液，送入溶剂回收车间，减压蒸馏回收甲醇；对收集的经过体积浓度为10～15％的甲醇洗脱液处理的大孔吸附树脂柱，接着用体积浓度为50～65％的甲醇洗脱液进行洗脱，所用体积浓度为50～65％的甲醇洗脱液体积为3～6BV，洗脱液流速为1～3BV/h；分别收集体积浓度为50～65％的过柱甲醇洗脱液和脱附莱菔素的大孔吸附树脂柱，对收集的体积浓度为50～65％的过柱甲醇洗脱液，即为莱菔素粗分离液，用于下一步制备高纯度莱菔素浓缩液；对收集的脱附莱菔素的大孔吸附树脂柱，泵入体积浓度为80～100％的甲醇洗脱液进行洗脱，所用该甲醇洗脱液体积为3～6BV，洗脱液流速为1～3BV/h；分别收集体积浓度为80～100％的过柱甲醇洗脱液和经过浓度为80～100％的甲醇洗脱液处理后的树脂柱，对收集的体积浓度为80～100％的过柱甲醇洗脱液，送入溶剂回收车间，减压蒸馏回收甲醇；对收集的经过浓度为80～100％的甲醇洗脱液处理后的树脂柱，用1～2BV的纯净水冲洗；分别收集过柱冲洗液和经过纯净水冲洗的大孔吸附树脂柱，对收集的过柱冲洗液，送入溶剂回收车间，减压蒸馏回收甲醇；对收集的经过纯净水冲洗的大孔吸附树脂柱，即为再生莱菔素粗分离系统，可再次用于粗分离莱菔素；(3)制备高纯度莱菔素浓缩液第(2)步完成后，将活化的罗门哈斯大孔吸附树脂AmberliteTMXAD1600或AmberliteTMXAD761，用湿法装入中压层析柱，其中罗门哈斯大孔吸附树脂体积与第(2)步制备的莱菔素粗分离液体积之比为1L∶10L～1L∶16L，再安装好转换接头并分别连接恒流泵和紫外检测器，就组装成莱菔素醇水置换系统；莱菔素醇水置换系统组装完成后，将第(2)步制备的莱菔素粗分离液浓缩后泵入制备型液相色谱柱，流动相甲醇：水的比例为30∶70，流速为20～25mL/min，按照色谱图收集流出液，即得到莱菔素制备液；用恒流泵以1～2BV/h的流速泵入第(3)步组装的莱菔素醇水置换系统，分别收集过柱液和吸附莱菔素的大孔吸附树脂柱，对收集的过柱液，减压真空浓缩回收甲醇，再泵入生化处理池进行处理，达标后排放；对收集的吸附莱菔素的大孔吸附树脂柱，用2～3BV的体积浓度为100％甲醇溶液进行洗脱，流速为1.5～2.5BV/h，根据紫外检测器上的紫外峰收集洗脱液和大孔吸附树脂柱，对收集的洗脱液减压真空浓缩回收甲醇，即获得高纯度莱菔素浓缩液，用于下一步制备高纯度莱菔素冻干物；对收集的经过体积浓度为100％的甲醇洗脱液处理后的树脂柱，用1～2BV的纯净水冲洗；分别收集过柱冲洗液和经过纯净水冲洗的大孔吸附树脂柱，对收集的过柱冲洗液，送入回收车间，回收甲醇；对收集的经过纯净水冲洗的大孔吸附树脂柱，即为再生莱菔素醇水置换系统，可再次醇水置换莱菔素溶液；(4)制备高纯度莱菔素冻干物第(3)步完成后，将高纯度莱菔素浓缩液在?40℃冷冻室中预冻7～10h，预冻结实后将其取出立刻放置于已经预设好的冷冻干燥机内，开启真空泵、真空计，冷冻干燥温度为?60℃～?50℃，绝对真空度为10～50Pa，直至冰块完全消失殆尽取出，即为高纯度莱菔素冻干物，纯度达99％以上。
关 键 词：
法律状态：公开
IPC专利分类号：C07C331/22(2006.01)I