一种连续制备萝卜硫素的方法
专利类型：发明专利
语 言：中文
申 请 号：CN201510217440.7
申 请 日：20150429
申 请 人：重庆大学广州六顺生物科技有限公司
申请人地址：400044 重庆市沙坪坝区沙正街174号
公 开 日：20160824
公 开 号：CN104803900B
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摘 要：一种连续制备萝卜硫素的方法，具体涉及从萝卜籽中制备萝卜硫素的方法。本发明以风干萝卜籽为原料，经破碎、脱脂、水解、装配萝卜硫苷连续水解柱、装配萝卜硫苷连续水解分离系统、制备萝卜硫苷液、制备富集萝卜硫素大孔吸附树脂柱、通过分离及冷冻干燥，制备出纯度高达98％以上的萝卜硫素。本发明原料来源广泛，方法可操作性强，设备易获得，工艺简单，生产过程安全，便于工业化生产。采用本发明方法制备出的有防癌抗癌等活性的萝卜硫素产品，可广泛应用于医药、保健品等行业中。
主 权 项：一种连续制备萝卜硫素的方法，其特征在于具体方法步骤如下：(1).制备脱脂萝卜籽粉取风干后含水量低于8％的萝卜籽，先用中药粉碎机粉碎，再按照萝卜籽粉质量∶正己烷体积之比为1kg∶4～8L的比例，先将萝卜籽粉置于罐式浸出器中，泵入正己烷，控制温度为20～40℃，进行第一次搅拌脱脂30～60min，第一次搅拌脱脂完成后，放出溶解有萝卜籽油脂的正己烷，再泵入正己烷进行第二次搅拌脱脂，第二次搅拌脱脂泵入的正己烷体积及脱脂温度和时间均与第一次搅拌脱脂相同，第二次搅拌脱脂完成后，放出溶解有萝卜籽油脂的正己烷，第二次搅拌脱脂后的脱脂萝卜籽渣，在搅拌下通入表压为0.1～0.4MPa、流速为5～15m/s的压缩空气，压出脱脂萝卜籽粉渣中残余的正己烷，直至无正己烷滴出时止，分别收集第一次、第二次搅拌脱脂放出、压缩空气压出的溶解有萝卜籽油脂的正己烷及含正己烷的压缩空气，对收集的含正己烷的压缩空气，送入冷凝器中进行冷凝处理，回收正己烷，对于第一次、第二次搅拌脱脂放出及压缩空气压出的溶解有萝卜籽油脂的正己烷进行合并；再送至脱溶剂釜进行脱正己烷处理，回收正己烷并获得粗制萝卜籽油；对获得的粗制萝卜籽油，进行精炼处理，制备出精炼食用萝卜籽油；对于收集的脱脂萝卜籽粉，用于制备萝卜硫苷连续水解柱或制备萝卜硫苷液；(2).装配萝卜硫苷连续水解柱第(1)步完成后，将第(1)步制备的脱脂萝卜籽粉用20～60目的不锈钢筛网进行筛分，分别收集过筛物和未过筛物，对于收集的未过筛物，将其装填于内径为100～200mm、高度为600～1200mm的自制不锈钢夹层水解柱中，直至装填高度达到500～1000mm时，再连接好转换接头，装配出萝卜硫苷连续水解柱，用于连续水解萝卜硫苷，对于收集的过筛物，即为脱脂萝卜籽细粉，用于制备萝卜硫苷液；(3).装配萝卜硫苷连续水解分离系统第(2)步完成后，先按照HPD?700或HPD?600大孔吸附树脂体积∶脱脂萝卜籽粉质量为1L∶20～30kg的比例，将新购HPD?700或HPD?600大孔吸附树脂装入内径为50～100mm、高度为500～600mm的不锈钢层析柱，直至装填高度达到500～600mm时，连接好转换接头，就装配出大孔吸附树脂层析柱，接着按照使用说明书的要求，先向大孔吸附树脂层析柱中泵入乙醇，直至泵入的乙醇完全浸没大孔吸附树脂时止，接着浸泡4～6h，再泵出乙醇，洗涤至流出液中无紫外吸收，然后用纯水洗涤至无乙醇味时止，分别收集浸泡、洗涤大孔吸附树脂后的乙醇和用乙醇及纯水洗涤后的大孔吸附树脂层析柱，对收集的浸泡、洗涤大孔吸附树脂后的乙醇，进行蒸馏回收，对收集的先后用乙醇、纯水洗涤后的大孔吸附树脂层析柱，即为活化大孔吸附树脂层析柱，将收集的活化大孔吸附树脂层析柱的进液口与第2步装配出的萝卜硫苷连续水解柱出液口用管道连接，就装配出萝卜硫苷连续水解分离系统，用于连续水解萝卜硫苷，分离萝卜硫素；(4).制备萝卜硫苷液第(3)步完成后，将第(2)步收集的脱脂萝卜籽细粉置于热风烘箱中，在85～100℃的温度下处理1～2h，进行硫代葡萄糖苷酶失活处理，失活处理完成后，按照硫代葡萄糖苷酶失活后的脱脂萝卜籽细粉质量∶甲醇体积为1kg∶10～20L的比例，把硫代葡萄糖苷酶失活后的脱脂萝卜籽细粉分散于回流提取器中，于50～70℃下搅拌浸提0.5～1h，提取完成后进行过滤，分别收集压滤液和压滤渣，对收集的压滤渣，送入脱溶剂釜，通入表压为0.1～0.4MPa、流速为5～15m/s的压缩空气进行脱溶剂处理，直至滤渣无甲醇味时止，分别收集脱甲醇渣及含甲醇的压缩空气，对收集的脱甲醇渣，用于制作饲料添加剂；对收集的含甲醇的压缩空气，送入冷凝器中进行冷凝处理，回收甲醇，对收集的压滤液，置于旋转蒸发器中，在温度为30～40℃、绝对真空度为0.06～0.09MPa下进行真空浓缩处理，回收甲醇，直至浓缩物成膏状时止，浓缩完成后，将获得的膏状浓缩物按照膏状浓缩物质量∶纯水体积为1kg∶5～15L的比例，用纯水溶解后用0.5～1.5um的微孔滤膜过滤并收集滤液，就制备出萝卜硫苷液，用于补充连续萝卜硫苷液，对收集的滤渣，用于制作饲料添加剂；(5).制备富集萝卜硫素大孔吸附树脂柱第(3)步和(4)步完成后，先向第(3)步装配出的萝卜硫苷连续水解分离系统中泵入温度38～42℃的纯水，纯水泵入流速为萝卜硫苷连续水解柱体积BV的1～2.5倍/h，泵入时间为4～6h，纯水泵入完成后再向萝卜硫苷连续水解分离系统中泵入第4步制备的萝卜硫苷液，萝卜硫苷液泵入流速与泵入温度为38～42℃的纯水相同，泵入时间为6～12h，萝卜硫苷液泵入完成后，分别收集使用后的萝卜硫苷连续水解柱、吸附萝卜硫素的活化大孔吸附树脂层析柱及从活化大孔吸附树脂层析柱出液口流出的液体，对收集的使用后的萝卜硫苷连续水解柱，将柱内的脱脂萝卜籽粉压出，再进行干燥，用于制备饲料添加剂；对收集的吸附萝卜硫素的活化大孔吸附树脂层析柱，即为富集萝卜硫素大孔吸附树脂柱，用于下一步骤分离萝卜硫素；对收集的从活化大孔吸附树脂层析柱出液口流出的液体，泵入生化处理池进行净化处理，达标后排放；(6).制备萝卜硫素初级浓缩液第(5)步完成后，向第(5)步制备出的富集萝卜硫素大孔吸附树脂柱中先泵入甲醇体积分数为15％的水溶液，泵入流速为1～2.5BV/h，泵入量与富集萝卜硫素大孔吸附树脂柱体积BV之比为3.5～6∶1，分别收集经甲醇体积分数为15％的水溶液洗脱后的富集萝卜硫素大孔吸附树脂柱和洗脱液，对收集的洗脱液，进行真空浓缩，回收甲醇；对收集的经甲醇体积分数为15％的水溶液洗脱后的富集萝卜硫素大孔吸附树脂柱，再泵入体积分数为60％的甲醇水溶液进行洗脱，泵入流速为1～2.5BV/h，泵入量与富集萝卜硫素大孔吸附树脂柱体积BV之比为2.5～4∶1，分别收集洗脱萝卜硫素后的大孔吸附树脂和含萝卜硫素的甲醇洗脱液，对收集的含萝卜硫素的甲醇洗脱液，进行旋转蒸发浓缩，直至浓缩液无甲醇时止，分别收集馏出液和浓缩液，对收集的流出液，含高浓度甲醇，用纯水适当稀释后可用于配制甲醇体积分数为15％的水溶液；对收集的浓缩液，即为萝卜硫素初级浓缩液，用于下一步制备萝卜硫素，对收集的洗脱萝卜硫素后的大孔吸附树脂，泵入其5～10倍树脂体积的纯水进行洗涤再生，分别收集洗涤液和洗涤再生的大孔吸附树脂，对收集的洗涤再生的大孔吸附树脂，可再次用于富集萝卜硫素；对收集的洗涤液，进行旋转蒸发浓缩，进行回收甲醇处理；(7).制备萝卜硫素第(6)步完成后，将第(6)步制备出的萝卜硫素初级浓缩液用孔径为0.22～0.5微米的微孔滤膜过滤，收集滤过液并泵入反相C18硅胶为填料的制备型液相色谱柱中，萝卜硫素初级浓缩液体积∶C18硅胶填料质量之比为1L∶50～80kg，控制色谱条件为：检测波长245nm、柱温25℃；洗脱流速800.0mL·min?1；A组分为甲醇，B组分为超纯水；梯度洗脱程序为：在0min～15min区间，流动相A组分由5％上升至25％，B组分由95％下降至75％；在15min～75min区间，流动相中的A组分由25％上升至65％，B组分由75％下降至35％，分别收集出峰时间为37～41min区间的洗脱液和其它区间的洗脱液，对收集的收集出峰时间为37～41min区间的洗脱液，在35～45℃下进行真空浓缩，直至浓缩液中萝卜硫素质量浓度达到30～50％时，停止浓缩，将该浓缩液送入低温冰箱中，在?20～?40℃条件下先预冻6～10h，再送入冷冻干燥机中，在30～40Pa真空度、?50～?60℃温度下，进行冷冻干燥30～40h，就制备出纯度超过98％的萝卜硫素，经液质联机分析鉴定，其纯度为98～99.3％，总收得率为0.35～0.55％，对收集的其它区间的洗脱液，与第6步收集的甲醇体积分数为15％水溶液洗脱富集萝卜硫素大孔吸附树脂柱获得的洗脱液合并后进行真空浓缩，回收甲醇后用作制备异硫氰酸类生物农药的原料。
关 键 词：
法律状态：公开
IPC专利分类号：C07C331/22(2006.01)I