一种适用于microRNAs分析的番茄总RNA提取方法

专利类型：发明专利 

语 言：中文 

申 请 号：CN201010521015.4 

申 请 日：20101027 

发 明 人：杨迎伍李正国吴玉邓伟 

申 请 人：重庆大学 

申请人地址：400030 重庆市沙坪坝区沙正街174号 

公 开 日：20120822 

公 开 号：CN101974512B 

代 理 人： 

代理机构： 

摘　　要：本发明提供了一种适用于microRNAs分析的番茄总RNA提取方法。本方法特征在于通过80℃预热的酚和TLES缓冲液(100mM三羟甲基氨基甲烷(Tris，pH 8.0)、10mM氯化锂、10mM乙二胺四乙酸(EDTA，pH 8.0)、1％十二烷基硫酸钠(SDS，w/v))，并结合异丙醇和乙酸钠/乙醇提取总RNA，不仅能分离大片段RNA，而且能够有效沉淀小分子RNA。提取的RNA质量高，完整性好，可以用于RT-PCR、northern杂交等基因分离和表达分析，以及microRNAs等小分子RNA的研究。该方法具有简单、廉价、高效、易于操作等优点，适合在分子生物学实验中使用。 

主 权 项：一种适用于MICRORNAS分析的番茄总RNA提取方法，其特征在于以下操作：A、在离心管中加入等体积的酚和TLES缓冲液(100MM三羟甲基氨基甲烷(TRIS，PH?8.0)、10MM氯化锂、10MM乙二胺四乙酸(EDTA，PH?8.0)、1％十二烷基硫酸钠(SDS，W/V))，并于80℃充分预热；B、适量于液氮中研磨成粉的番茄植物材料转入至上述管中，并于80℃保温30S后，剧烈涡旋1MIN，然后加入1/2体积的氯仿/异戊醇(24∶1)(TLES∶酚∶氯仿∶异戊醇，25∶25∶24∶1)，充分涡旋混匀后，4℃，12,000G离心5MIN，将上清液转移入一新离心管中；C、再用等体积的氯仿/异戊醇抽提一次，上清液转至一新离心管，加入等体积的异丙醇，室温沉淀30MIN后，4℃，12,000G离心10MIN，去除上清液；D、沉淀溶解于适量DEPC水中，再加入1/10体积的3MOL/L乙酸钠和2倍体积的无水乙醇，?80℃沉淀1H或?20℃过夜后，4℃，12,000G离心30MIN，去除上清液，RNA沉淀经70％乙醇洗两次后，干燥，溶于适量DEPC水中。 

关 键 词： 

法律状态：生效 

IPC专利分类号：C12N15/10