一种厌氧氨氧化菌中完整梯烷脂的超声提取方法
专利类型：发明专利
语 言：中文
申 请 号：CN201510565364.9
申 请 日：20150908
申 请 人：重庆大学
申请人地址：400044 重庆市沙坪坝区沙正街174号
公 开 日：20170804
公 开 号：CN105136944B
代 理 人：李海华
代理机构：重庆博凯知识产权代理有限公司 50212
摘 要：本发明公开了一种厌氧氨氧化菌中完整梯烷脂的超声提取方法。完整梯烷脂是存在于厌氧氨氧化菌胞内厌氧氨氧化体膜上的一种特殊磷脂。已有研究表明以完整梯烷脂为研究对象，可为厌氧氨氧化的研究提供新思路及新的支撑信息，具有较高的生态和生理学研究意义。本方法的操作流程为：取样→冷冻干燥→加入提取液→超声提取→调整提取液组分比例→离心分液→氮吹浓缩。经高效液相串联质谱分析，证明该方法效果良好，提取纯度高。
主 权 项：一种厌氧氨氧化菌中完整梯烷脂的超声提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1）取样：取5?10G污泥作为样品，所述污泥为含有厌氧氨氧化细菌的含水污泥；2）冷冻干燥：采用真空冷冻干燥技术去除步骤1）的样品中所含游离水分，即将样品置于真空度0.08～0.09MPA、温度为?40℃的环境下16?24H；将冷冻干燥后的样品置于?20℃下备用；3）加入提取液：将步骤2）制备的样品置于50ML玻璃离心管中，并加入15?20ML提取液，所述的提取液是体积比为2:1:0.8的甲醇、二氯甲烷和磷酸盐缓冲液的混合溶液；4）超声提取：在步骤3）中的玻璃离心管外设置冰浴，运用超声波破碎仪进行超声破碎处理；所述的超声破碎处理采用间歇运行模式，即超声开启3?6S，关闭4?6S，其中，超声总时间为15?20MIN；5）调整提取液组分比例：向步骤4）的玻璃离心管中补充二氯甲烷和磷酸盐缓冲液，使提取液中甲醇、二氯甲烷和磷酸盐缓冲液的体积比为1:1:0.9；6）离心分液：将步骤5）的玻璃离心管在5000RPM下离心10MIN；将离心后的上清液转移至分液漏斗中静置分液，收集下层的有机相液体；7）氮吹浓缩：将步骤6）收集的下层的有机相液体置于氮吹仪中,在35℃下进行浓缩，浓缩至有机相液体完全干燥成固相，形成底层沉淀；将底层沉淀溶解在1ML的有机溶剂中，该有机溶剂是体积比4：1的正己烷和异丙醇；再用孔径为0.45μM的有机滤膜过滤，得到完整梯烷脂母液，置于?80℃存放。
关 键 词：
法律状态：公开
IPC专利分类号：G01N30/06; G01N30/88