专利类型:发明专利
语 言:中文
申 请 号:CN201510049392.5
申 请 日:20150131
申 请 人:重庆大学
申请人地址:400044 重庆市沙坪坝区沙正街174号
公 开 日:20160907
公 开 号:CN104560713B
代 理 人:汤东凤
代理机构:北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350
摘 要:本发明公开了一种用于培养及检测肺癌细胞的微流控芯片制备方法,包括如下步骤:制备掩膜;配制水凝胶材料;制备细胞培养层:将细胞培养层掩膜置于玻璃基片之上,在避光条件下注入水凝胶材料,使水凝胶材料固化;制备微通道层:将微通道层掩膜置于制得的细胞培养层之上,在避光条件下注入水凝胶材料,使水凝胶材料固化;洗脱及制备封盖层:将制得的微通道层进行洗脱,再用PDMS封盖;由本发明方法制备的微流控芯片可同时培养多组细胞样本,为细胞提供三维生长环境,其完全模拟人体肺部组织结构,为细胞提供更接近于人体的生长环境,其代谢产物非常接近于人体细胞的代谢产物,使检测数据更加贴近于人体真实情况,更利于对肺癌的早期诊断。
主 权 项:用于培养及检测肺癌细胞的微流控芯片制备方法,其特征在于,包括如下步骤:制备掩膜:采用绘图软件分别绘制细胞培养层和微通道层掩膜图,并采用菲林胶片打印该掩膜图,制得细胞培养层掩膜和微通道层掩膜;其中,细胞培养层掩膜上设有按矩阵排列的60个圆,每排12个,共5排,每个圆的直径为1.5mm;靠近矩阵圆的一端设有一矩形,矩形的长为16mm,宽为11mm;细胞培养层掩膜上的圆和矩形均不透光,其余部分为透光;微通道层掩膜包括网状线路和矩形,网状线路的一端为横向尺寸为2.5mm的长方形,长方形的一端分化为两条最大横向尺寸为5mm的第一支路,每条第一支路再分化形成第二支路,第二支路再分化形成纵横交错的网状结构的微支路,微支路的横向尺寸为1mm,在微支路交错处、且与细胞培养层掩膜上的圆对应的位置设有直径为1.5mm的圆;矩形与网状线路的另一端连接,矩形的长为16mm,宽为11mm,该矩形与位于细胞培养层掩膜上的矩形相对应;微通道层掩膜上的网状线路和矩形部分为不透光,其余部分为透光;配制水凝胶材料:加入PEGDA和HEMA,?形成PEGDA和HEMA混合物;加入NVP,得到预聚物;在避光条件下加入光引发剂;采用超声振荡,将混合物振荡均匀无气泡,静置,得到水凝胶材料;所述水凝胶材料中,PEGDA与HEMA的体积比为1.5:1,NVP的体积为PEGDA与HEMA总体积的10%,光引发剂的质量为预聚物质量的0.4%;或者,所述水凝胶材料中,PEGDA与HEMA的体积比为2.3:1,?NVP的体积为PEGDA与HEMA总体积的15%,光引发剂的质量为预聚物质量的0.3%;制备细胞培养层:将细胞培养层掩膜置于玻璃基片之上,细胞培养层掩膜距离玻璃基片1mm;将玻璃基片与细胞培养层掩膜四周封闭,其内形成一水凝胶灌注腔体,得到细胞培养层模具;在避光条件下采用注射器往细胞培养层模具腔体内注入水凝胶材料,使水凝胶材料完全填充满腔体;然后将细胞培养层模具整体置于一密闭空间内,采用紫外灯垂直照射细胞培养层掩膜表面30分钟,使水凝胶材料固化,在固化过程中始终充氮气保护;待水凝胶固化成型后,去掉细胞培养层掩摸,得到细胞培养层;制备微通道层:将微通道层掩膜置于制得的细胞培养层之上,微通道层掩膜距离细胞培养层1mm;将细胞培养层与微通道层掩膜四周封闭,其内形成一水凝胶灌注腔体,得到微通道层模具;在避光条件下采用注射器往微通道层模具腔体内注入水凝胶材料,使水凝胶材料完全填充满腔体;然后将微通道层模具整体置于一密闭空间内,采用紫外灯垂直照射细胞培养层掩膜表面10~20分钟,使水凝胶材料固化,在固化过程中始终充氮气保护;待水凝胶固化成型后,去掉微通道层掩摸,得到微通道层;洗脱及制备封盖层:将制得的微通道层置于PBS缓冲液中进行洗脱,去除未反应完全的水凝胶材料,再用PDMS封盖,形成封盖层;完成微流控芯片的制备。
关 键 词:
法律状态:授权
IPC专利分类号:C12M3/04(2006.01)I;C12M1/00(2006.01)I